เนื้อหา

• ความแตกต่างหลัก
• ซับใต้ เมื่อเทียบกับ Blotting ตะวันตก
• แผนภูมิเปรียบเทียบ
• Blotting ใต้คืออะไร?
• Western Blotting คืออะไร?
• ความแตกต่างที่สำคัญ
• ข้อสรุป

ความแตกต่างหลัก

ความแตกต่างที่สำคัญระหว่าง Southern Blotting และ Western Blotting คือ Southern Blotting เป็นเทคนิคที่ใช้ในการตรวจจับชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงในตัวอย่างที่กำหนดในขณะที่ Western Blotting จะใช้ในการค้นหาโปรตีนเฉพาะในตัวอย่างที่กำหนด

ซับใต้ เมื่อเทียบกับ Blotting ตะวันตก

Blotting เป็นเทคนิคที่นักวิทยาศาสตร์ใช้ในการแยกโมเลกุลประเภทต่าง ๆ จากส่วนผสมหรือตัวอย่าง ในเทคนิคนี้โมเลกุลของแมคโครโมเลกุลเช่นกรดนิวคลีอิก (DNA และ RNA) และโปรตีนในส่วนผสมจะเคลื่อนที่ผ่านแผ่นเจล ที่นี่อนุภาคนาทีจะเคลื่อนที่เร็วกว่าอนุภาคที่ใหญ่กว่า โมเลกุลเหล่านี้จะถูกกดลงบนพื้นผิวของเมมเบรนที่ตรึงแล้วซึ่งจะย้ายโมเลกุลไปยังเมมเบรน มีหลายประเภทของการซับบนพื้นฐานของการตรวจจับของวัสดุที่เฉพาะเจาะจงเช่น blotting ใต้, blotting ภาคเหนือและ blotting ตะวันตก Southern blotting เป็นชนิดของ blotting ที่ใช้ตรวจจับ DNA ในขณะที่ blotting ตะวันตกใช้เพื่อค้นหาโปรตีน Southern blotting พัฒนาโดย Edward M. Southern ในปี 1975 ดังนั้นจึงเป็นที่รู้จักกันในชื่อ blotting ใต้ ในทางกลับกันกระดาษซับมันแบบตะวันตกได้รับการพัฒนาโดยกลุ่มของ George Stark ที่ Stanford University ในปี 1979 ชื่อนี้ใช้เพื่อให้ตรงกับการซับใต้ การซับใต้นั้นใช้เพื่อหาลำดับดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงในขณะที่การซับแบบตะวันตกนั้นใช้เพื่อหาลำดับกรดอะมิโนหรือโปรตีนที่เฉพาะเจาะจง

แผนภูมิเปรียบเทียบ

ซับใต้	Blotting ตะวันตก
เทคนิคที่ใช้ในการค้นหาลำดับดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงในการผสมที่กำหนดเรียกว่าซับใต้	เทคนิคที่ใช้ในการหาลำดับกรดอะมิโนที่เฉพาะเจาะจงของโปรตีนในส่วนผสมที่กำหนดเรียกว่าซับใต้
พัฒนาโดย
กระดาษซับใต้ได้รับการพัฒนาโดย Edward M. Southern ในปี 1975	blotting ตะวันตกได้รับการพัฒนาโดยกลุ่มของ George Stark ที่ Stanford University ในปี 1979
ประเภทของการตรวจจับ
ซับใต้ใช้เพื่อค้นหาลำดับดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจง	Western blotting ใช้เพื่อหาลำดับกรดอะมิโนหรือโปรตีนที่เฉพาะเจาะจง
หลัก
มันทำงานบนหลักการของการผสมพันธุ์	มันทำงานบนหลักการของวิธีการตรวจภูมิคุ้มกันหรือการโต้ตอบแอนติเจนและแอนติบอดี
การสอบสวน
DNA ที่มีเกลียวเดี่ยวหรือ RNA บางครั้งใช้เป็นโพรบ	แอนติบอดีปฐมภูมิและทุติยภูมิถูกใช้เป็นโพรบ
เจลอิเล็กโทร
Agarose gel electrophoresis ใช้ในการซับใต้	SDS PAGE / Polyacrylamide gel ใช้ในการแยกโปรตีนในซับออกตะวันตก
ขั้นตอนการซับ
กระดาษซับภาคใต้เป็นไปตามกระบวนการถ่ายโอนของเส้นเลือดฝอย	Western Blotting ทำตามขั้นตอนการถ่ายโอนไฟฟ้า
ตัวอย่าง
ในระหว่างการซับใต้นั้นตัวอย่างจะต้องถูกทำให้ลดลง	ในระหว่างการซับแบบตะวันตกตัวอย่างควรอยู่ในสถานะดั้งเดิม
การปิดกั้น
ไม่มีขั้นตอนใด ๆ ในการบล็อกเหมือนเกี่ยวข้องกับการซับใต้	ในช่วงซับเลือดตะวันตกบริเวณที่มีแอนติบอดีเชิญชมจะถูกบล็อกบนกระดาษ nitrocellulose ด้วยความช่วยเหลือของนมผงหรือวัวซีรัมอัลบูมิน (BSA)
วิธีการติดฉลาก
วิธีการติดฉลากทั่วไปที่ใช้ในการซับใต้คือการใช้สี chromogenic หรือ radiolabelling หรือการติดฉลากเรืองแสง ฯลฯ	วิธีการติดฉลากที่ใช้ในการซับแบบตะวันตกคือการใช้แอนติบอดี้หรือฟลูออไรด์ที่มีการเรืองแสงสีฟลูออเรสเซ็นซิลสีย้อมหรือการก่อตัวของ diaminobenzidine ฯลฯ
วิธีการตรวจจับ
การตรวจจับแสง, การบันทึกภาพอัตโนมัติและการเปลี่ยนสีใช้เป็นวิธีการตรวจจับการซับภาพในภาคใต้	วิธีการตรวจจับในการซับแบบตะวันตกเป็นการเปลี่ยนสีและการตรวจจับแสงเป็นต้น
ใบสมัคร
การใช้ blotting ภาคใต้ใช้ในการตรวจหา DNA, การทดสอบความเป็นพ่อ, การใช้นิ้วของ DNA, เพื่อระบุตัวผู้ตกเป็นเหยื่อ, เพื่อระบุอาชญากร, ค้นหาตัวแทนที่ติดเชื้อและเพื่อระบุการกลายพันธุ์หรือการจัดเรียงยีน ฯลฯ	Western blotting ใช้เพื่อค้นหาจำนวนโปรตีนในส่วนผสมเพื่อตรวจหาเชื้อ HIV ไวรัสและแบคทีเรีย ฯลฯ ในซีรัมเพื่อค้นหาโปรตีนที่บกพร่องและใช้เป็นมาตรการที่แน่นอนสำหรับโรคเริมไวรัสตับอักเสบบีไลม์ โรคและโรค Creutzfeldt-Jacob เป็นต้น

Blotting ใต้คืออะไร?

Southern blotting เป็นวิธี blotting ที่เก่าแก่ที่สุดที่ Edwin Southern ได้รับจึงตั้งชื่อเป็น blotting ทางใต้ มันถูกใช้เพื่อค้นหาลำดับของ DNA ที่เฉพาะเจาะจงในตัวอย่างหรือส่วนผสมที่กำหนด ขั้นตอนที่เกี่ยวข้องในระหว่างการซับใต้คืออิเล็กโตรโฟรีซิสการถ่ายโอนและการตรวจหาลำดับเฉพาะ ประการแรก DNA ถูกแยกส่วนด้วยความช่วยเหลือของเอนไซม์ จำกัด เฉพาะ จากนั้นชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่ต้องการจะถูกแยกผ่านเจลอิเล็กโทรโฟเรซิส ชิ้นส่วนเหล่านี้ถูกทำลายด้วยความช่วยเหลือของสารละลายอัลคาไลน์เช่น NaOH ฯลฯ เพื่อแยกดีเอ็นเอสองเส้น ชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่ผ่านการแยกเดี่ยวเหล่านี้จะถูกส่งผ่านไปยังเมมเบรนผ่านกระบวนการซับ จากนั้น DNA ที่ถูกหุ้มด้วยเมมเบรนนี้จะถูกจัดการด้วยโพรบที่มีป้ายกำกับ โพรบนี้จะแนบไปกับเกลียวเสริมบน DNA ของเมมเบรนซึ่งสามารถมองเห็นได้ด้วย autoradiogram เป็นต้น

Western Blotting คืออะไร?

วิธีการซับแบบตะวันตกถูกคิดค้นโดยกลุ่มของ George Stark ที่ Stanford University ซึ่งใช้ในการระบุลำดับของกรดอะมิโนในโปรตีน มันยังเป็นที่รู้จักกันในนาม blot โปรตีนหรือภูมิคุ้มกัน - blotting ขั้นตอนในระหว่างการซับแบบตะวันตกคืออิเล็กโตรโฟรีซิสการถ่ายโอนและการตรวจหาโปรตีนจำเพาะ ก่อนอื่นผสมให้เข้ากัน จากนั้นแยกโมเลกุลที่สนใจด้วยความช่วยเหลือของอิเลคโตรโฟรีซิส ถ่ายโอนโมเลกุลเหล่านี้บนเมมเบรนและระบุโปรตีนที่เฉพาะเจาะจงโดยใช้โพรบเฉพาะ

ความแตกต่างที่สำคัญ

1. เทคนิคที่ใช้ในการหาลำดับดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงในส่วนผสมที่กำหนดนั้นเป็นที่รู้จักกันในชื่อภาคใต้ซับในขณะที่เทคนิคที่ใช้ในการหาลำดับกรดอะมิโนที่เฉพาะเจาะจงของโปรตีนในส่วนผสมที่กำหนดให้เป็นที่รู้จักกันในภาคใต้ซับ
2. กระดาษซับใต้ได้รับการพัฒนาโดย Edward M. Southern ในปี 1975 เป็นที่รู้จักกันในชื่อ blotting ใต้ ในทางกลับกันกระดาษซับหมึกสีขาวถูกพัฒนาโดยกลุ่มของ George Stark ที่ Stanford University ในปี 1979
3. ซับใต้ใช้เพื่อค้นหาลำดับดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจง ตรงกันข้าม blotting ตะวันตกจะใช้ในการหาลำดับกรดอะมิโนหรือโปรตีนที่เฉพาะเจาะจง
4. การซับใต้ใช้หลักการของการผสมพันธุ์แบบพลิกด้าน blotting ตะวันตกทำงานบนหลักการของวิธีการตรวจภูมิคุ้มกันหรือการโต้ตอบแอนติเจนและแอนติบอดี
5. DNA ที่ติดอยู่เดี่ยวหรือบางครั้ง RNA ถูกใช้เป็นโพรบในซับใต้ในอีกด้านหนึ่งในแอนติบอดี blotting ปฐมภูมิและทุติยภูมิตะวันตกถูกใช้เป็นโพรบ
6. Agarose gel electrophoresis ใช้ในการซับใต้ในขณะที่เจล SDS PAGE / Polyacrylamide gel ใช้ในการแยกโปรตีนในการซับแบบตะวันตก
7. การซับในภาคใต้เป็นไปตามกระบวนการถ่ายโอนของเส้นเลือดฝอยในทางกลับกัน Western blotting ปฏิบัติตามขั้นตอนการถ่ายโอนไฟฟ้า
8. ในระหว่างการซับด้านใต้ตัวอย่างจะต้องถูกทำให้ลดลงในขณะที่ในระหว่างการซับในแนวตะวันตกนั้นตัวอย่างควรอยู่ในสถานะดั้งเดิม
9. ไม่มีขั้นตอนใด ๆ ที่คล้ายกับการบล็อกในภาคใต้ของกระดาษซับในด้านพลิกระหว่างตะวันตกกระดาษซับแอนติบอดีที่ไม่ถูกบล็อกบนเว็บไซต์ nitrocellulose กระดาษด้วยความช่วยเหลือของนมผงหรือวัวเซรั่มอัลบูมิน (BSA)
10. วิธีการติดฉลากทั่วไปที่ใช้ในการซับใต้คือการใช้สี chromogenic หรือ radiolabelling หรือการติดฉลากเรืองแสง ฯลฯ ในขณะที่วิธีการติดฉลากที่ใช้ในการ blotting ตะวันตกคือการใช้แอนติบอดีที่ติดฉลากเรืองแสงหรือ radiolabelling สี chromogenic หรือการก่อตัวของ diaminobenzidine ฯลฯ
11. การตรวจจับแสง, การบันทึกภาพอัตโนมัติและการเปลี่ยนสีจะใช้เป็นวิธีการตรวจจับในการซับด้านใต้ในขณะที่วิธีการตรวจจับในการซับแบบตะวันตกเป็นการเปลี่ยนสีและการตรวจจับแสง ฯลฯ
12. การใช้ blotting ภาคใต้ใช้ในการตรวจหา DNA, การทดสอบความเป็นพ่อ, การใช้นิ้วของ DNA, เพื่อระบุตัวผู้ตกเป็นเหยื่อ, เพื่อระบุอาชญากร, หาตัวแทนการติดเชื้อและเพื่อระบุการกลายพันธุ์หรือการจัดเรียงยีน ฯลฯ ในทางกลับกัน เพื่อตรวจหาเชื้อเอชไอวีไวรัสและแบคทีเรีย ฯลฯ ในซีรัมเพื่อค้นหาโปรตีนที่มีข้อบกพร่องและใช้เป็นมาตรการที่แน่นอนสำหรับโรคเริมโรคตับอักเสบบีโรค Lyme และโรค Creutzfeldt-Jacob เป็นต้น

ข้อสรุป

การอภิปรายเหนือสรุปว่า blotting ใต้เป็นเทคนิค blotting ที่เก่าแก่ที่สุดที่ใช้ในการค้นหาส่วนดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงในตัวอย่างในขณะที่ blotting ตะวันตกถูกค้นพบหลังและใช้ในการระบุลำดับที่เฉพาะเจาะจงของกรดอะมิโนหรือโปรตีนที่เฉพาะเจาะจง